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96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒
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詳細信息
一、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)elisa試劑盒實驗原理
采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人可溶程序性死亡因子(sPD-1)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人可溶程序性死亡因子(sPD-1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
二、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響*后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
三、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒產品優(yōu)勢
1 . 品種齊全、質量可靠、靈敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性好。
2 . 特異性強：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
3 . 重復性好：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
4 . 同城（上海）需要代測可免費上門取樣，享送貨上門服務。
5 . 根據客戶需求專業(yè)定制ELISA試劑盒并提供免費代測服務。
6 . 臻科生物可提供專業(yè)技術服務,全方位為您解決實驗進程中所遇到一切實驗問題。
四、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒組成
| 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
| 標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
五、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產品。
10. 實驗還需要酶標儀（450nm），37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。
11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
12. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
13. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
六、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
七、96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
八、關于96T人可溶程序性死亡因子(sPD-1)ELISA試劑盒的特別聲明
上海臻科生物科技有限公司長期專業(yè)供應各類科研產品，包括elisa試劑盒、農殘試劑盒、放免試劑盒、生物試劑、檢測卡等優(yōu)質產品。公司本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質的可靠產品，公司承諾如有任何質量的問題請打電話與我司工作人員聯系,免費包退換（非人為因素造成的），歡迎咨詢。
更新時間：2024/11/11 9:03:13
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小陶