一、牛非酯化脂肪酸(NEFA）elisa試劑盒實驗原理

牛非酯化脂肪酸(NEFA）ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被牛非酯化脂肪酸(NEFA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛非酯化脂肪酸(NEFA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 

二、訂貨信息

三、樣本處理要求

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 

2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩��?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

四、產(chǎn)品優(yōu)勢

1. 品種齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好、操作簡便、穩(wěn)定性好。

2. 同城（上海）需要代測可免費上門取樣，享免費送貨上門服務(wù)。

3. 訂購ELISA試劑盒可提供免費代測服務(wù)。

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5. 臻科生物可提供專業(yè)技術(shù)服務(wù),全方位為您解決實驗進(jìn)程中所遇一切實驗問題。

五、牛非酯化脂肪酸(NEFA）ELISA試劑盒組成

六、注意事項

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 實驗還需要酶標(biāo)儀（450nm），37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。

11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

12. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

13. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

14.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能人上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

15.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

七、關(guān)于試劑盒的特別說明

上海臻科生物科技有限公司長期專業(yè)供應(yīng)各類科研產(chǎn)品，包括ELISA試劑盒、農(nóng)殘試劑盒、生物試劑、檢測卡等優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。公司本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質(zhì)的可靠產(chǎn)品，公司承諾如有任何質(zhì)量的問題包退換（非人為因素造成的）。產(chǎn)品優(yōu)惠活動促銷中，歡迎新老客戶前來選購。 

更新時間：2024/11/11 9:03:13